Estructura primaria de una PLA2 básica, miotóxica local y sistémica, deducida a partir de mRNA extraído de veneno total de Crotalus durissus terrificus

Abstract

Logra aislar el mRNA que codifica la proteína PLA 2, utilizando una técnica simple. Esto es, amplificando el cDNA que codifica la PLA 2 D49 a través de RT-PCR. El análisis del cDNA codificador de PLA 2 muestra que esta tiene un marco de lectura abierto de 414 pares de bases que codifican un polipéptido de 138 aminoácidos, con un péptido señal de 16 residuos de aminoácidos, seguido de una secuencia polipeptídica de 122 aminoácidos que corresponden a la PLA 2. El análisis también muestra que la proteína está compuesta por 33 aminoácidos con carga: 11 aminoácidos ácidos, 22 aminoácidos básicos, 44 aminoácidos polares y 28 aminoácidos hidrofóbicos, con un punto isoeléctrico de 8.58 y una masa molecular de 14312.52 Da. El análisis de homología y árbol filogenético muestran que esta PLA 2 presenta un alto grado de homología y forma parte de las PLA 2 básicas N6F24D49. Además, se logró purificar dos isoformas de PLA 2 (fracciones V y VI) empleando cromatografía en HPLC de fase reversa con un alto grado de pureza, según lo revelado por la SDS-PAGE. Al realizar la repurificación de la fracción V, esta se muestra como un monómero, pues el espectro revela la presencia de una sola cadena polipeptídica con una masa molecular de 14238.71 Da. Según el análisis biológico, la PLA 2 V es capaz de elevar los niveles de CK plasmáticos cuando es inyectada por vía intramuscular y por vía intravenosa.