Purificación, caracterización y expresión recombinante de la fosfolipasa A2 miotóxica del veneno de la serpiente Bothrops pictus y su efecto sobre la viabilidad y migración de células de cáncer de mama

Abstract

Caracteriza una PLA2 miotóxica del veneno de la serpiente Bothrops pictus, evaluar su efecto sobre células de cáncer de mama y expresarla de manera recombinante en Pichia pastoris. Bothrops pictus es una serpiente endémica del Perú y una desencadenante de ofidismo. El efecto miotóxico de su veneno es conocido pero el componente principal que desencadena la miotoxicidad no ha sido descubierto. El trabajo reporta la purificación de una PLA2 básica miotóxica del veneno de B. pictus (BpMtx). La proteína es mostrada como dimérica en una PAGE-SDS y muestra una masa molecular de 13 740 Da (forma monomérica) mediante MALDI-TOF. BpMtx representa el 2.8% del veneno de B. pictus. BpMtx también muestra el efecto miotóxico (DMM: 8.951 ± 0.301 μg) y efecto edemático (DEM: 21.757±2.702 μg) en ensayos in vivo, así como actividad enzimática PLA2 (0.216 ± 0.035 U/mg). En cuanto a su efecto antitumoral, BpMtx redujo la viabilidad celular (66.8 ± 3.1% con 50 μg/mL de proteína) y la migración celular (a 0.621 ± 0.052 veces el control con 20 μg/mL de proteína) de células tumorales MDA-MB-231. Por otro lado, la secuencia de cDNA de BpMtx codifica una proteína de 137 aminoácidos (incluyendo 16 aminoácidos de péptido señal). Mediante el modelamiento por homología se predijo que cada monómero presenta 4 hélices α y una doble hoja β antiparalela. El análisis filogenético y el alineamiento múltiple permitió determinar que BpMtx pertenece al grupo de isoformas Lys49-PLA2. La secuencia de cDNA es clonada en Escherichia coli y expresada en Pichia pastoris. La PLA2 recombinante (rBpMtx) es expresada a partir de las 96 horas en un medio BMMY. rBpMtx es purificada a partir de un paso cromatográfico y mostró efecto miotóxico, sin diferencia significativa con la versión nativa.