Genotipificación de cepas de Escherichia coli aisladas de haces de crías de alpacas procedentes del departamento de Puno mediante PCR múltiple

Abstract

Desarrolla una técnica de PCR múltiple para la tipificación de cepas de Escherichia coli productora de shigatoxina (STEC), E.coli enterohemorrágica (EHEC) O157:H7 y E.coli enteropatogénica típica y atípica (EPECt y EPECa) aisladas a partir de heces de alpacas. Se desarrollaron dos PCR múltiple (PCRm1 y PCRm2) utilizando siete pares de cebadores específicos para los genes de la shigatoxina 1 (stx1A), shigatoxina 2 (stx2A), la proteína intimina (eaeA), del antígeno somático O157 de E. coli (rfbO157), el antígeno flagelar H7 (fliCH7) de E.coli y el pili formador de paquetes (bfpA). Las técnicas de PCR múltiple fueron usadas para amplificar siete genes en cepas controles de STEC, EHEC O157:H7 y EPEC y presentaron una alta sensibilidad del orden de 0,05 a 0,5 ng de ADN. PCRm1 y PCRm2 fueron utilizadas para la tipificación de 303 cepas de E.coli aisladas a partir de heces de crías de alpacas con y sin diarrea provenientes de Puno. Los resultados indicaron que el 13 % (39) de las cepas de E.coli fueron positivas al menos a un gen, 7,7 % (23) fueron clasificadas como STEC y 5,3 % (16) como EPECa. No se identificaron cepas de EPECt ni del serotipo O157 de STEC. Los resultados indican la factibilidad del uso de las dos técnicas de PCR múltiple para la identificación rápida, sensible y específica de STEC, EHEC O157:H7 y EPEC y la importancia de las alpacas como potenciales reservorios animales de patotipos de E.coli causantes de importantes enfermedades en los niños y adultos.