Evaluación de la respuesta inmune Th1 y Th2 en cuyes infectados experimentalmente con una cepa aislada de campo de Salmonella Typhimurium

Abstract

Evalúa la expresión relativa de las citoquinas involucradas en la respuesta inmune Th1 y Th2 en 21 cuyes (Cavia porcellus) inoculados experimentalmente con una cepa aislada de campo de Salmonella Typhimurium a una dosis de 102 UFC/ml vía intraperitoneal y 7 cuyes inoculados con la misma cepa inactivada (grupo control). Se utilizó animales destetados de 15-30 días de edad, sin importar sexo y clínicamente sanos, todos mantenidos en las mismas condiciones en el bioterio de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Se agruparon los cuyes en 4 pozas (A, B, C y D) y cada poza con 7 animales cada uno, además se colocaron 2 cuyes centinelas no inoculados. La toma de muestras de sangre y tejidos se realizó lo días 1, 3, 5, 7, 9, 15 y 30 postinoculación, siendo colectados 3 individuos del grupo tratamiento y 1 del grupo control. El aislamiento de los leucocitos sanguíneos se realizó por la técnica del gradiente de Ficoll y la extracción del ARN total de éstas células mediante el uso de Trizol. El ADNc fue sintetizado a partir de las muestras de ARN y luego se desarrolló la PCR en tiempo real con “primers” específicos para las citoquinas en estudio. La expresión relativa fue determinada por el método comparativo 2-ΔΔCt a fin de evaluar la expresión de los ARNm de las citoquinas analizadas con respecto al calibrador (cuy sano), usando como gen constitutivo de referencia al GAPDH. Las expresiones de los genes de todas las citoquinas mostraron un aumento con respecto a los calibradores y un incremento con mayor intensidad con respecto a las expresiones de los cuyes del grupo control; además, una cinética ascendente con respecto a los días post-inoculación, los primeros días hubo predominio de las expresiones del perfil Th1, posteriormente ambas aumentan con predominio final de las citoquinas de la respuesta inmune Th2. El análisis histopatológico y el aislamiento se realizó para confirmar la infección y los animales mostraron las lesiones características de salmonelosis, siendo el hígado el órgano afectado con mayor frecuencia.