Efeitos da terapia de reposição com doses fisiológicas de testosterona sobre a reatividade vascular coronariana em ratos espontaneamente hipertensos orquiectomizados

Abstract

En hombres la reducción de testosterona (T) favorece el desarrollo de enfermedades cardiovasculares, atribuyéndose a la T un probable papel protector. En este contexto, nuestro objetivo fue evaluar los efectos del tratamiento con dosis fisiológicas de T sobre la reactividad vascular coronaria. El estudio fue aprobado por el comité de ética con No. 062/2017 - CEUA/UFES. Se utilizaron ratas macho espontáneamente hipertensas (SHR). Se formaron 4 grupos: SHAM, orquiectomizado (ORX), ORX + T, ORX + T + AI (inhibidor de la aromatasa). Se obtuvieron la presión arterial sistólica (PAS). La reactividad vascular coronaria se estudió por el método de Langendorff, se realizaron curvas con bradicinina (BK 10⁻¹⁰ a 10⁻⁶ M) antes y después de la administración del inhibidor de óxido nítrico sintasa (L-NAME), inhibidor de ciclooxigenasa (indometacina) solos o combinados con inhibidor de CYP (clotrimazol) o con bloqueador de canales de potasio (tetrabutilamonio). La expresión de eNOS, COX-1, COX-2, gp91phox y Akt se cuantificó mediante Western blot. La síntesis de óxido nítrico (NO), anión superóxido (O₂•-) y peróxido de hidrógeno (H₂O₂) fue evaluado por espectrofluorimetría. La PAS disminuyó en el grupo ORX, pero se mantuvo en el grupo ORX + T. La presión de perfusión coronaria basal (PPC) no se alteró en ningún grupo. El NO y PGI₂ participaron en la modulación de la PPC en los grupos SHAM, ORX y ORX +T. La relajación a BK no se alteró en el grupo ORX y aumentó en los grupos ORX+T y ORX+T+AI, sin diferencia entre estos últimos. El NO, PGI₂ y la hiperpolarización dependiente de endotelio (EDH) participaron en la relajación a BK en los grupos SHAM y ORX, y solo NO y EDH (mayor participación) en el grupo ORX + T. La expresión de eNOS, COX-1, COX-2 y gp91phox no se alteró en los grupos ORX ni ORX + T, sin embargo, la expresión de Akt aumentó en el grupo ORX pero no se restableció en el grupo ORX + T. No hubo alteración de la síntesis de NO en los grupos, por otro lado, los niveles de O₂•- y H₂O₂ aumentaron en el grupo ORX+T. En conclusión, la terapia de reemplazo con dosis fisiológicas de testosterona potencia la relajación a bradicinina, independientemente de la aromatización, en el lecho vascular coronario de ratas espontáneamente hipertensas orquiectomizadas, con aumento de la hiperpolarización dependiente de endotelio.

Acredita-se que a redução de testosterona (T) em homens favoreça o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, atribuindo à T um provável papel protetor ao nível cardiovascular. Diante desse contexto, o nosso estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da terapia de reposição com doses fisiológicas de T sobre a reatividade vascular coronariana. Todos os procedimentos foram aprovados sob o No. 062/2017 – CEUA/UFES. Foram utilizados ratos machos hipertensos adultos da linhagem SHR (Spontaneously Hypertensive Rat) apresentando 10 semanas de idade. Os animais foram orquiectomizados com 8 semanas de idade (grupo ORX) e imediatamente iniciado o tratamento com testosterona (0,5 mg/Kg, s.c.) por 15 dias (grupo ORX + T) ou inibidor de aromatase (0.1 mg/kg/dia via gavagem – grupo ORX + T + AI), os animais SHAM passaram pelo mesmo procedimento cirúrgico, no entanto, sem a remoção das gônadas. A pressão arterial sistólica (PAS) foi mensurada por pletismografia de cauda. Parâmetros ponderais foram coletados. A reatividade vascular coronariana foi avaliada de acordo com o método de Langendorff e curvas de bradicinina (10⁻¹⁰ a 10⁻⁶ M) antes e após inibidores da óxido nítrico sintase (Nω-nitro-L-arginina metil-éster - L-NAME 100 μM) e da ciclooxigenase (indometacina - INDO 2,8 μM) isolados ou combinados com inibidor da CYP (clotrimazol – CLOT 0,75μM) ou com bloqueador do canal para potássio (tetrabutilamônio - TBA 0,75 mM) foram realizada. A intensidade da expressão das proteínas eNOS, COX-1, COX-2, gp91phox e Akt foram quantificadas pelo método de Western blotting. O protocolo de marcação para a síntese de NO, ânion superóxido (O₂•-) e peróxido de hidrogênio (H₂O₂) em artérias coronárias foi por espectrofluorimetria. O peso relativo da próstata e da vesícula seminal diminuiu, contudo o das adrenais e da pituitária aumentou pela orquiectomia e foram revertidos parcial ou totalmente pela T. A PAS diminuiu no grupo ORX, porém foi mantida no grupo ORX + T. A pressão de perfusão coronariana basal não foi alterada entre os grupos estudados e o NO e a PGI2 participaram da modulação da pressão coronariana nos grupos SHAM, ORX e ORX +T. O relaxamento à BK não foi alterado no grupo ORX e aumentou nos grupos ORX + T e ORX + T + AI, sem diferença entre estes últimos. O NO, PGI2 e a hiperpolarização dependente do endotélio (EDH) participaram do relaxamento à BK nos grupos SHAM e ORX, e somente NO e EDH (sendo que este último apresentou maior participação) no grupo ORX + T. A expressão da eNOS, COX-1, COX-2 e gp91phox não foi alterada pela orquiectomia nem pela T, porém a expressão da Akt aumentou no grupo ORX mas não foi restaurada no grupo ORX + T. A síntese de NO não foi alterada nos grupos, por outro lado os níveis de O₂•- e H₂O₂ aumentaram no grupo ORX +T. Em conclusão, nosso principal achado é que a terapia de reposição com doses fisiológicas de testosterona melhora o relaxamento à BK, independente da aromatização, no leito vascular coronariano de SHR orquiectomizado, com aumento da EDH [ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs) estimulando canais para potássio e a provável participação do H₂O₂]. A caracterização desses mecanismos poderia levar a uma melhor compreensão dos efeitos do tratamento com testosterona no leito vascular coronariano, além de contribuir para desenvolvimento de melhores formas de terapia para o tratamento do hipogonadismo e das doenças cardiovasculares.