Estandarización de ensayo inmunológico a partir de antígenos proteicos para la detección de Trypanosoma cruzi.

Abstract

La enfermedad de chagas es causada por el protozoo Trypanosoma cruzi. Actualmente, su diagnóstico se basa en técnicas que buscan la detección del parásito. En esta investigación se utilizó herramientas de bioinformática para identificar péptidos altamente conservados que pueden interferir en el ciclo celular del parásito interrumpiendo su función. Se utilizó el programa Bepipred 2.0 para realizar una predicción In-silico de péptidos lineales y Swiss model para identificar candidatos conservados. Se logró realizar el tamizaje masivo de 152 secuencias de péptidos derivados de la proteína Cruzipaina (acceso GenBank: AAG35357.1), desplazados por 3 aminoácidos. Usando un robot para los pasos de acoplamiento de acetilación N-terminal para aumentar la estabilidad de estos péptidos. A continuación, la membrana conteniendo los péptidos impregnados (spot) fue enfrentada a suero humano positivo para T. cruzi y la inmunodetección fue completada utilizando anticuerpos policlonales antihumano conjugado con fosfatasa alcalina. La señal fue revelada utilizando el sustrato de la fosfatasa alcalina, generando un precipitado azul sobre el “spot” que albergan el péptido reconocido por anticuerpos, obteniendo una intensidad de los colores directos que se cuantificó usando el software ImagenJ. Se seleccionaron tres péptidos de 21 aminoácidos y un péptido de 17 aminoácidos que dieron mayor intensidad para realizar su síntesis química, la masa molecular de estos péptidos fue reconfirmada por espectroscopia de masas. Los péptidos sintetizados fueron utilizados para estandarizar una prueba de inmunodetección en placas de microtitulación, los valores de una reacción positiva fueron medidos a una absorbancia de 492 nm con un espectrofotómetro.