Estandarización de técnicas moleculares por PCR convencional y PCR en tiempo real para el diagnóstico de rubéola en el INS

Abstract

Se estandarizó la técnica TR-PCR en tiempo real y convencional. Se utilizó patrones positivos (n=150) y negativos (n=150) al VR mediante IFD. La extracción de ARN, síntesis de ADNc, PCR convencional y tiempo real se realizaron utilizando kits comerciales. Se utilizaron tres cebadores para amplificar una región codificante del gen E1 del VR frente a patrones positivos, vacuna combina (Wistar RA 27/3-Edmoston Zagreb) como controles positivos, y patrones positivos de sarampión, VHS1, VHS2, PVB19 y Mycoplasma, como controles negativos. Los resultados se determinaron mediante el análisis de bandas en gel de agarosa y curvas de amplificación. La PCR convencional detectó 4,47 x 10-2 ng/μl de ARN con un 98 % sensibilidad, 100 % especificidad, 100 % VPP y 98 % VPN y la PCR en tiempo real detectó 4,36 x 10-5 ng/μl de ARN, con un 98,6 % sensibilidad, 100 % especificidad, 100 % VPP y 98,6 %VPN, teniendo una correlación muy buena. Las técnicas resultaron una herramienta diagnóstica con alta sensibilidad y especificidad para el diagnóstico del VR, siendo la más sensible la PCR en tiempo real.