Análisis de expresión global de proteínas por electroforesis y espectrometría de masas de Sarcocystis aucheniae en sangre de Vicugna pacos (Alpaca): una aproximación proteómica Arequipa–2018

Abstract

Los miembros del género Sarcocystis (Apicomplexa: Sarcocystidae) son parásitos protozoarios intracelulares que infectan una amplia gama de animales domésticos y salvajes, lo que resulta en pérdidas económicas en animales de producción en todo el mundo. Sarcocystis spp tiene ciclos de vida indirectos donde los caninos y felinos sirven como los principales hospedadores definitivos, mientras que una variedad de animales domésticos y salvajes sirven como huéspedes intermedios, incluidos los camélidos sudamericanos como las alpacas, las llamas y los guanacos. Debido a su fibra y carne de alta calidad, la cría de alpacas se está volviendo popular en muchas partes del mundo debido a su menor contenido de colesterol comparando con otras carnes rojas, por lo que tiene el potencial de ser un producto valioso para los mercados local e internacional, sin embargo, la carne de camélidos sudamericanos puede degradarse y /o incluso discriminarse debido a la presencia de sarcoquistes macroscópicos en los músculos esqueléticos, lo que genera importantes pérdidas económicas para los criadores. En esta investigación llevamos a cabo un análisis en profundidad sobre la expresión global de proteínas por electroforesis y espectrometría de masas; a través de un enfoque proteómico de Sarcocystis aucheniae en la sangre de Vicugna pacos (alpaca). Las proteínas provenientes del plasma sanguíneo procedente de alpacas , fueron purificadas en columnas del sistema HITrap (H&C USA.) El sistema cromatográfico usado es el de cromatografía convencional. Fueron colectadas fracciones de 1 mm por tubo, posteriormente se hizo una electroforesis en gel de poliacrilamida de doble dimensión, se analizaron los geles de electroforesis bidimensionales y se determinó la presencia de cinco spots de proteínas presentes en la alpaca enferma que no estaban en la que estaba aparentemente sana, se hizo la determinación de la masa total y el estudio de homología secuencial de los diferentes péptidos obtenidos por clivajes enzimáticos los que fueron analizados por espectrómetros acoplados a sistemas de cromatografía de alto desempeño y utilizados con fuentes de ionización tipo Maldi (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization) y nanoelectrospray (ESI). Posteriormente se hizo el estudio del alineamiento de los fragmentos peptídicos utilizando bancos de datos el NCBI-BLAST. Las secuencias obtenidas fueron denominadas como A 201, A 202, A 203, A 204 y A 205. A 201 se alineó con antígenos del micronema L2 cuyo nombre es Lectina SML2, acceso p81860 de 138 aminoácidos perteneciente al Sarcocystis muris. A 202, A 203, A 204 y A 205 se alinearon con una proteína correspondiente a un antígeno mayor del micronema, cuyo nombre es Lectina SML1, acceso Q08668 de 241 aminoácidos de S. muris. Además, los cinco fragmentos obtenidos se alinearon con otro antígeno del micronema Lectina SML3 acceso Q26539 de 241 aminoácidos y correspondiente a S. muris. En cuanto a las secuencias A 202, A 203, A 204 y A 205 corresponden a la proteína mayor del micronema cuyo acceso es AAB42049 de 164 aminoácidos perteneciente también a S. muris.