Amplificacion por polimerasas y recombinasas (RPA) y PCR en tiempo real (qPCR) para su validacion en el diagnostico molecular de fasciolasis humana. Cusco 2017

Abstract

Fasciolasis es la infección por trematodos más ampliamente distribuida en el mundo. En el Perú la Fasciolasis humana es considerada una enfermedad parasitaria reemergente e hiperendémica. El diagnóstico de Fasciolasis humana sigue siendo un problema debido a la poca sensibilidad de los métodos parasitológicos empleados así como a las precarias condiciones de salud en zonas rurales donde la Fasciolasis manifiesta su verdadero impacto. En el presente trabajo de investigación se desarrollaron y validaron dos pruebas de diagnóstico altamente sensibles y específicas para la detección de Fasciolasis humana: la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real q(PCR) y un método de amplificación por Polimerasas y Recombinasas (RPA). El q(PCR) así como el RPA mostraron un límite de detección (LOD) de 1.6 pg/µl de ADN de Fasciola hepatica, ambas pruebas no mostraron reacciones cruzadas en el análisis in-sílico así como con ADN de: Schistosoma mansoni, T solium, Ascaris lumbricoides, Uncinarias, Trichuris trichura, Hymenolepis nana, Strongyloides stercoralis. La sensibilidad del q(PCR) y el RPA fueron de 66% y 87% respectivamente. Ambas pruebas mostraron una elevada especificidad del 100%. El RPA después de ser adaptado a una plataforma de detección de flujo lateral, demostró una sensibilidad del 95.23% y una especificidad del 90.5%. En conclusión, el q(PCR) y el RPA son pruebas altamente sensibles y específicas para diagnosticar la infección crónica de Fasciola hepatica usando muestras de heces. El RPA de Fasciola adaptado a las tiras de flujo lateral tiene el potencial para el despliegue de la prueba en áreas endémicas con recursos limitados.