“Estandarización de la prueba de elisa de captura para la detección de antígenos de Tripanosoma cruzi en muestras de orina y suero de Cavia porcellus infectado experimentalmente”

Abstract

En el presente trabajo se describe la estandarización de ELISA de captura para la detección de antígenos de T. cruzi en muestras de orina y suero de especímenes de Cavia porcellus (cuyes) infectados experimentalmente, empleando anticuerpos policlonales obtenidos de tres especies que fueron inmunizados con antígenos de T. cruzi. Se seleccionó la dupla de anticuerpos: IgY anti proteína de membrana de Gallus gallus domesticus (gallina) como anticuerpo de captura (4 µg/ml) e IgG anti TESA de Vicugna pacos (alpaca) como anticuerpo de detección (4 µg/ml), purificados por cromatografía de afinidad. Además, se utilizó el conjugado antillama a una dilución de 1/7500, buffer de bloqueo compuesto por PBST más leche semidescremada al 6% y BSA 1%, y el sustrato fue orto-fenilendiamina. El límite de detección del antígeno TESA en muestra de orina contaminada artificialmente fue de 4 ng. Los niveles de antigenuria estuvieron relacionados positivamente con niveles altos de parasitemia. Los métodos empleados para la concentración de orinas no muestran diferencias significativas en la cinética de detección de antígenos de T. cruzi mediante ELISA. En cuanto a la cinética de detección de antígenos en suero se obtuvo diferencias significativas entre las muestras de sueros de cuyes (Cavia porcellus) infectados y sanos. Los resultados demuestran que este ensayo es importante y puede ser usado como herramienta para el diagnóstico de T. cruzi en humanos.