Métodos de selección espermática y tasa de fecundación in vitro en ovocitos de alpaca (Vicugna pacos)

Abstract

La eficiencia reproductiva de alpacas machos está limitada por el pequeño tamaño testicular y largo periodo de eyaculación. Nuestro objetivo es evaluar el efecto de los métodos de selección espermática swim-up y washing sobre la tasa de fecundación in vitro de ovocitos de alpacas. Espermatozoides fueron obtenidos por slicing de cuerpos y colas de epidídimo de alpacas sacrificadas/beneficiadas (n=7), congelados en nitrógeno líquido y, una vez descongelados se evaluó motilidad progresiva (25 ± 5.96%), vitalidad (32 ± 5.57%) y concentración espermática (66.5 ± 24.4 x 106 espermatozoides ml-1), enseguida seleccionados mediante swim-up se obtuvo 18% ± 6.78, 22% ± 8.58 y 13.5 x 106 ± 11.0 x 106ml-1 de motilidad progresiva, vitalidad y concentración espermática respectivamente, frente a 23% ± 4.83, 29% ± 8.30 y 52.0 x 106 ± 28.3 x 106ml-1 de motilidad progresiva, vitalidad y concentración espermática respectivamente, obtenido por washing; ambos mostraron similares características de motilidad progresiva y vitalidad (p> 0,05), pero el método washing proveyó mayor concentración espermática respecto a swim-up. De 335 ovarios de alpacas sacrificadas/beneficiadas, 839 complejo cúmulus-ovocito (COC) de grado I y II, se utilizaron en 13 sesiones de fecundación in vitro. Los COC fueron madurados en medio de maduración (27 horas con 5% de CO2 y 38.5°C en gotas de 50 ul con 10 COC/gota), denudados parcialmente por pipeteo suave y colocados en 45 ul de medio de fecundación; exponiéndolos luego a una concentración final de 397 y 484 x 103 espermatozoides mótiles ml-1 para swim-up y washing respectivamente (sin agente capacitante), co-incubados por 72 horas y evaluados solo tasa de segmentación. Se observó 35% (147/418) de segmentación para swim-up frente a 37% (155/421) para washing, no habiendo diferencia significativa (p> 0,05), es decir, ambos métodos pueden ser usados en procesos de fecundación in vitro sin perjudicar la tasa de fecundación.

The male alpacas reproductive efficiency is limited by the small size testicular and long period of ejaculation. Our objective is to evaluate the effect of the methods of sperm selection swim-up and washing on the rate of in vitro fertilization of oocytes alpacas. Spermatozoa were obtained by slicing bodies and tails epididymal alpaca slaughtered (n = 7), frozen in liquid nitrogen and after thawing progressive motility (25 ± 5.96%), vitality (32 ± 5.57%) and evaluated sperm concentration (66.5 ± 24.4 x 106 sperm mL-1), once selected by swim-up was obtained 6.78 ± 18%, 22% ± 8.58 and 106 ± 13.5 x 11.0 x 106 mL-1 motility, vitality and sperm concentration respectively , versus 23% ± 4.83, 29% ± 8.30 and 106 ± 52.0 x 28.3 x 106 mL-1 motility, vitality and sperm concentration, respectively, obtained by washing; both showed similar progressive motility and vitality (p> 0.05), but the washing method provided greater sperm concentration relative to swimup. 335 ovaries of alpacas slaughtered, 839 cumulus-oocyte complex (COC) Grade I and II, were used in 13 sessions of in vitro fertilization. COC were matured in maturation medium (27 hours with 5% CO2 and 38.5 ° C in 50 ul drops of 10 COC / drop), partially denuded by gentle pipetting and placed in 45 ul of fertilization medium; then exposing them to a final concentration of 397 and 484 x 103 motility sperm mL-1 for washing and swim-up respectively (without capacitating agent), co-incubated for 72 hours and evaluated only rate segmentation. 35% (147/418) of segmentation was observed swim-up versus 37% (155/421) for washing, with no significant difference (p> 0.05), ie, both methods can be used in processes IVF without affecting fertilization rate.