Descripción de la distribución y actividad mitocondria en ovocitos inmaduros de alpaca

Abstract

La mitocondria cumple un papel vital en el metabolismo energético del ovocito, dentro del cual la actividad y distribución mitocondrial son dos parámetros validos e importantes para decir que un ovocito es competente. El objetivo de este estudio fue describir los diferentes patrones de distribución y actividad mitocondrial en ovocitos inmaduros de alpaca empleando el fluorocromo MitoTracker Red CMXRos. Se trabajó con ovarios obtenidos del Camal Municipal de Huancavelica, los cuales fueron remitidos a Lima en suero fisiológico a 4°C en las siguientes 10 a 16 horas, para procesarse en el Laboratorio de Biotecnologías Reproductivas y Celulares de la Universidad Científica del Sur (UCSUR). Una vez en el laboratorio, se realizó la aspiración de folículos con diámetro entre 3-4 mm, utilizándose el sedimento para la búsqueda de ovocitos en un estereoscopio a 40X. En total se trabajaron con 132 ovocitos inmaduros, los cuales una vez clasificados en base a su calidad fueron desnudados por medio de pipeteo suave, a fin de ser incubados con el MitoTracker. Para ello se colocó en una lámina portaobjeto 100 µl de PBS y 0.5 µl de MitoTracker Red CMXRos (1mM) para llegar a una concentración final de 100 nM, luego se incubo en oscuridad a 28°C por 20 minutos. La actividad mitocondrial, se determinó en base a la emisión de fluorescencia (alta 79-126 pixeles, media 50-78.9 pixeles y baja 6-49.9 pixeles), la distribución mitocondrial a través del patrón de distribución citoplasmática (homogéneo y heterogéneo) y agregados mitocondriales (liso y granuloso) por cada calidad de ovocito. En función a eso encontramos que la emisión de fluorescencia en la calidad I fue: alta 72.72%, media 18.18%, baja 9.09%; calidad II: alta 24.24%, media 36.36%, baja 39.39%; calidad III: alta 18.18%, media 42.42%, baja 39.39%; calidad IV: alta 18.80%, media 36.36%, baja 45.45% y la distribución mitocondrial (distribución citoplasmática) calidad I: homogéneo 66.60%, heterogéneo 33.30%; calidad II: homogéneo 39.30%, heterogéneo 60.60%; calidad III: homogéneo 66.60%, heterogéneo 33.30%; calidad IV: homogéneo 60.60%, heterogéneo 39.30%; (agregados mitocondriales) calidad I: liso 42.40%, granuloso 57.50%; calidad II: liso 6.0%, granuloso 93.90%; calidad III: liso 48.40%, granuloso 51.50%; calidad IV: liso 45.40%, granuloso 54.50%. Los resultados mostraron que se puede describir rangos de emisión de fluorescencia (actividad mitocondrial) y patrones de distribución mitocondrial para ovocitos inmaduros en alpaca, generando información de potencial importancia para futuros trabajos relacionados a evaluación y maduración ovocitaria.