Detecção molecular de Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Rickettsia spp. e agentes da Ordem Piroplasmida em cães, e seus carrapatos, da região metropolitana da Província de Piura, Piura-Peru

Abstract

La ehrlichiosis, la rickettsiosis y la babesiosis se han identificado como una causa creciente de morbilidad y mortalidad en los caninos y, en algunos países, en el hombre, debido a la mayor exposición a lugares donde las garrapatas son comunes. El objetivo de este trabajo fue obtener información epidemiológica sobre las infecciones y la presencia de agentes de los miembros de la Orden Rickettsiales y agentes de la Orden Piroplasmida, que afectan a los perros y sus garrapatas, de la región metropolitana de la provincia de Piura, a través de la reacción en cadena de la polimerasa ( PCR), PCR anidada, polimorfismos de restricción de fragmentos amplificados (RFLP), secuenciación y análisis filogenético, así como determinar las especies involucradas en infecciones y conocer la fauna de Ixodídeos presentes en esta región. Además de las muestras de sangre (216) y las garrapatas (984), se recopiló información sobre perros y sus dueños, tales como: rango de edad, sexo, presencia de garrapatas, estratos socioeconómicos y convivencia con otros animales. De las 984 garrapatas, solo se identificaron tres especies de garrapatas, Riphicephalus sanguineus (977), Amblyomma triste (seis) y Amblyomma tigrinum (una). Estos se clasificaron morfológicamente por etapa, especie y sexo, siendo: 67.3% (348/517) hembras adultas (almacenadas individualmente), 22.8% (118/517) machos adultos (almacenadas en un grupo de hasta siete especímenes) ) y 9,9% (51/517) ninfas (almacenadas en un grupo de hasta diez especímenes del mismo animal y la misma especie). Usando los cebadores ECC / ECB, ECAN / HE3 y PLATYS / HE3, se verificaron frecuencias de 18.5% (40/216), 52.5% (21/40) usando PCR y Nested-PCR, 35,0% (14/40) y 20% (8/40) para agentes de la familia Anaplasmataceae, E. canis, A. platys y coinfección entre estas dos especies, respectivamente, en el ADN extraído de los perros, restante 32.5% ( 13/40) de las muestras negativas, para estas dos especies por PCR anidada, pero diagnosticadas como E. canis y A. platys por secuenciación. Al considerar las variables de sexo (p = 0.034), presencia de garrapatas (p = 0.0001) y estratos socioeconómicos (p = 0.001), se encontró que había una asociación entre los diferentes grupos y la infección para los agentes de la familia Anaplasmataceae en perros. El análisis filogenético confirmó la presencia de las especies Ehrlichia canis, Anaplasma platys y Ehrlichia sp., en el ADN extraído de los perros. La frecuencia de las garrapatas positivas para los agentes de la familia Anaplasmataceae, por PCR, fue de 15.0% (78/517). Sin embargo, solo dos secuencias dieron como resultado una buena calidad para el análisis en GenBank, identificando al agente involucrado como E. canis. Además, de los 216 perros evaluados y 517 piscinas de garrapatas, 1.4% (3/216) y 0% (0/517) fueron positivos para Babesia sp. en PCR usando los cebadores PIRO A y PIRO B. En el RFLP, se demostró un patrón de escisión en todas las muestras, compatible con B. vogeli. Las secuencias mostraron una identidad del 99% para B. vogeli. En la evaluación de los agentes rickettsiales, se observó una tasa de infección en garrapatas del 0,2% (1/517) por PCR y secuenciación. Esta muestra fue positiva para gltA, pero negativa para ompA, ompB y htrA. El análisis filogenético mostró que la secuencia evaluada estaba agrupada en el clado R. felis, demostrando por primera vez, a través de técnicas moleculares, la presencia de agentes de miembros de la Orden Rickettsiales y agentes de la Orden Piroplasmida en perros, y sus garrapatas, en la provincia de Piura.