Introducción in-vitro de germoplasma de Mashua - Tropaeolum tuberosum R&P de las comunidades campesinas de Viacha y Amaru del distrito de Pisac - provincia Calca - región Cusco
Chacón Campana, Máximo Américo
2017
Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco
El proceso de introducción in-vitro como parte fundamental de la conservación in-vitro del gennoplasma y específicamente de los 69 morfotipos de mashua objeto de la presente investigación, demanda una técnica de desinfección y un medio de cultivo específico para óptimos resultados. Los tubérculos de mashua utilizados fueron colectados en los bancos de germoplasma de las comunidades campesinas de Amaru y Viacha, los cuales fueron transferidos al laboratorio de Cultivo de Tejidos de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional San Antonio Abad del Cusco, donde se almacenaron en ambientes oscuros que estimuló la generación de yemas, para luego ser sometidas a un proceso de desinfección y obtención de los explantes. Los explantes obtenidos fueron sometidos a cuatro tratamientos experimentales del proceso de introducción in-vitro, a partir de los cuales se determinó el protocolo adecuado para la introducción in vitro de material genético de 69 morfotipos de mashua. Para obtener el protocolo ideal para la introducción in-vitro se experimentó con dos técnicas de desinfección para el material vegetal (yemas): el Protocolo de Desinfección 1 (PDl) basado en lavados con detergente e inmersiones en fungicida por lmin, NaClO 3% por 3 min, NaClO 1 % por 3min, con lavados continuos con agua destilada, el Protocolo de Desinfección 2 (PD2) basado en lavados con detergente e inmersiones en fungicida por 7 min, alcohol etanol al 70% por 30 seg, NaClO al 5% durante 7 minutos; también se experimentó con dos medio de cultivo Murashige & Skoog modificados: el Medio de Cultivo Murashige & Skoog Modificado l (MSl) basado en sales de Murashige & Skoog, suplementado conglicina 2 mg/l, acido nicotínico 0.5 mg/l, piridoxina 0.5 mg/l, tiamina 0.1 mg/l, agar 15 gr/l, sacarosa 30 gr/l, y ácido giberéHco 1 mg/l; y el Medio de Cultivo Murashige & Skoog Modificado 2 (MS2) basado en sales de Murashige & Skoog, suplementado con glicina 2mg/l, acido nicotínico 0.5 mg/l, piridoxina 0.5 mg/l, tiamina 0.1 mg/l, agar 15gr/l, sacarosa 15 gr/1, Myo-inositol l00mg/l, Arginina 4 mg/I y ácido giberélico lmg/l. De la combinación de estas técnicas de desinfección y medios de cultivo M&S modificados se generaron cuatro tratamientos experimentales (PD 1+MS1, PD 1 +MS2, PD2+MS 1, PD2 + MS2) a evaluar. La evaluación del desarrollo vegetativo de las plántulas en cada tratamiento experimental se realizó registrando la longitud de las plántulas, el número de nudos y hojas cada 15 días durante 2 meses. Para el análisis estadístico se realizó el análisis de varianza para diseños experimentales con medidas repetidas, para comparar los datos obtenidos de los diferentes tratamientos; luego se realizó la prueba de rangos múltiples de Duncan, las cuales dieron como resultado que la combinación del PD2 y MS2, es la que ofrece mejores condiciones para la introducción in vitro del material genético de la Mashua. Lo destacado de este tratamiento es el mayor tiempo de inmersión en fungicida seguida de una inmersión en alcohol etanol de 70% y NaClO al 5%, lo que hace más efectivo la desinfección del material vegetal utilizado, para el medio de cultivo MS2 se utilizó algunos agregados que no eran parte del MS 1 como myo-inositol 100mg/l, arginina 4 mg/I, y se redujo la cantidad sacarosa 15 gr/~ siendo estos los factores que favorecieron el mejor desarrollo de los explantes durante el proceso de la investigación.
Tesis
http://repositorio.unsaac.edu.pe/handle/UNSAAC/2691



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